ビール事業の将来性に着目した東京や横浜の中小資本家が集まり、日本一のビール会社を目指して、1887（明治20）年9月、「日本麦酒醸造会社」は設立されました（資本金15万円、社長鎌田増蔵）。しかしながら、設立発起人の中に、資力と名声を兼ね備えた一流の資本家や実業家が参加しておらず、出資者を勧誘する力はありませんでした。1889年4月の株主名簿には、株主に三井物産会社の幹部らが登場します。こうした安定株主を得られたことで、日本麦酒醸造の経営がようやく安定したのです。

会社設立から2年が経過した1889（明治22）年10月、現在の東京・目黒区三田にヱビスビール醸造場が完成。当時、醸造場周辺は畑や山林の広がる民家もまばらな土地でした。突如として出現したレンガ造り3階建の近代建築は、人々の目を見張らせたことでしょう。ビールの仕込釜、蒸気機関、製氷機などの醸造設備はすべてドイツ製を購入。醸造技師もドイツから招き入れ、すべてが整った同年12月からビール醸造を開始しました。

1890（明治23）年2月、恵比寿ビールは発売されました。日本麦酒醸造会社は同年4月に開催予定の第3回内国勧業博覧会に「大黒ビール」というブランド名で出品しようとしていました。しかし大黒ブランドは既に商標登録されていたことから、同じ七福神の一神として福徳を授ける「恵比寿」に変更したのです。なお、この内国博で恵比寿ビールは札幌ビールとともに3等有功賞を受賞。審査報告では、恵比寿ビールが麒麟ビールと並んで品質「最良好」と絶賛されていました。